判断GLUT1 ELISA试剂盒灵敏度是否足够,关键在于验证它能否在你的样本基质中可靠检测到目标浓度。小编你梳理一下核心验证方法和关键考量点。
一、核心验证方法
标准曲线验证(评估理论灵敏度)
操作:用试剂盒提供的标准品,配制LOD/LOQ附近的低浓度梯度(如0.1、0.2、0.5 ng/mL),每个浓度做3个复孔。
合格标准:信号与空白孔比值(S/N)≥ 3,且变异系数(CV)≤ 20%。
注意:说明书标注的灵敏度(如<1.0 pg/mL)多基于标准品溶液,实际样本因基质干扰可能灵敏度下降。
加标回收率测试(评估实际样本中的灵敏度与准确性)
操作:在已知GLUT1浓度的样本(如血清、组织匀浆)中,加入已知量的标准品(如50 pg/mL),检测回收浓度。
合格标准:回收率在80%-120%之间。这是验证试剂盒在实际样本中能否准确检测低浓度目标的金标准。
稀释线性实验(评估低浓度下的线性范围与稳定性)
操作:将高浓度样本梯度稀释(如1:2, 1:4, 1:8),检测各稀释度信号。
合格标准:实测浓度与理论值偏差 ≤ 20%。这能证明试剂盒在低浓度区间仍能保持良好的线性关系,结果可靠。
二、关键考量点
匹配样本浓度范围:优先关注定量限(LOQ),确保它低于你样本中预期的GLUT1浓度。如果样本浓度较高(ng/mL级),选择pg/mL级别灵敏度的试剂盒反而可能导致信号饱和,需要大量稀释,引入操作误差。
关注批间差异:不同批次试剂盒性能可能有差异,建议新批次到货后重新验证灵敏度。
结合其他参数综合评估:灵敏度需与特异性(不与类似物交叉反应)、重复性(板内/板间CV < 15%)等指标结合,全面评估试剂盒性能。
三、快速验证建议
如果时间或资源有限,可优行加标回收率测试和稀释线性实验,两者能快速评估试剂盒在实际样本中的准确性和线性范围,是验证灵敏度是否足够的补充。